Optimización de cultivos de hepatocitos humanos para estudios de citotoxicidad* Optimization of human hepatocyte cultures for citotoxicity studies

RESUMENLos cultivos de hepatocitos entregan un valioso acercamiento al estudio de las funciones metabolicasespecificas del higado, evaluacion de citotoxicidad. No existen lineas humanas inmortales con funcionnormal. La inmortalizacion de hepatocitos humanos con el metodo UCHT1(medio de cultivo condicionadopor celulas tumorales de tiroides) permitira prolongar la sobrevida y funcion de estos, siendo util paraevaluar funcionalidad y citotoxicidad. Objetivo: Optimizar el cultivo de hepatocitos humanos. Metodologia:En cultivos primarios de hepatocitos humanos, se agrego medio UCHT1 cultivando en superficies decolageno, polilisina, gelatina y matrigel. Como control positivo, se utilizo linea Gherschenson (GER) paraevaluar curva de crecimiento y produccion de Glucogeno (PAS). Se evaluo citotoxicidad (LIVE/DEAD) enhepatocitos GER expuestos a Metotrexato (10, 100 y 1000 mM) a 24, 48 y 72 hrs. Resultados: Se realizo3 cultivos primarios. Fue efectiva la utilizacion de Polilisina y Colageno. Duracion 8 meses. No se harealizado la curva de crecimiento, ni evaluacion de funcionalidad en hepatocitos humanos. La linea GERtiene un crecimiento exponencial (tiempo duplicacion: 36 hrs). Se observo produccion de glucogeno encondiciones de diferenciacion hasta 120 hrs. La citotoxicidad por Metotrexato tiene una curva dosisdependiente, significativa en todas las concentraciones (p<0,001) (CL50 a 1000 mM a 24 hrs). Conclusio-nes: Se logro establecer una linea primaria de hepatocitos humanos. La polilisina y el colageno hanoptimizado el establecimiento de cultivos primarios. El metodo PAS permitio evaluar produccion deglucogeno (diferenciacion). Los valores de citotoxicidad demostraron un efecto dosis dependiente en lascondiciones experimentales. Logrando estandarizar el metodo para evaluacion futura de lineas celulareshumanas.PALABRAS CLAVE: Cultivos primarios de hepatocitos, Lineas continuas, UCHT1, citotoxicidad,Metotrexato (MTX), Linea Gerschenson.

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