Evaluación de tres protocolos para la extracción rápida de ARN total de tejidos de Prosopis juliflora (SW)

La extracción de ARN genómico de alta calidad para la amplificación por PCR, a partir de Prosopis spp., es complicada debido a la presencia de un alto porcentaje de metabolitos secundarios que se unen o coprecipitan con los ácidos nucleicos. En el presente estudio reportamos un protocolo modificado de sodio dodecil sulfato/fenol que incluye la eliminación de nitrógeno líquido en el proceso de maceración, β-mercaptoetanol en la extracción de tampón y paso de precipitación de etanol. Las proporciones de absorbancia A260/A280 del ARN aislado estaban en torno a 2 a 1.9, lo que sugiere que la fracción de ADN era pura y se puede usar para un análisis de PCR posterior. El ARN aislado por este protocolo es de calidad suficiente para aplicaciones moleculares; Esta técnica podría aplicarse a otros organismos que tienen sustancias similares que dificultan la extracción del ARN. Por último, esta propuesta representa una alternativa rápida, barata y eficaz para el aislamiento del ARN genómico de las hojas frescas de Prosopis spp., incluso en los laboratorios de baja tecnología.

[1]  D. Peng,et al.  A method for extracting high-quality total RNA from plant rich in polysaccharides and polyphenols using Dendrobium huoshanense , 2018, PloS one.

[2]  A. George.  Simple and efficient method for functional RNA extraction from tropical medicinal plants rich in secondary metabolites , 2018 .

[3]  M. J. Bermúdez-Guzmán,et al.  Optimización de un protocolo para aislamiento de DNA de hojas de Saccharum officinarum , 2017 .

[4]  A. Abdel-latif,et al.  Comparison of three genomic DNA extraction methods to obtain high DNA quality from maize , 2017, Plant Methods.

[5]  S. Sadia,et al.  Recent advances in molecular techniques for the identification of phytopathogenic fungi – a mini review , 2017 .

[6]  B. Bertrand,et al.  A single-step method for RNA isolation from tropical crops in the field , 2016, Scientific Reports.

[7]  P. Kilby,et al.  RNASwift: A rapid, versatile RNA extraction method free from phenol and chloroform. , 2016, Analytical biochemistry.

[8]  Zhao Yuxin,et al.  Isolation of high-quality RNA from Platycladus orientalis and other Cupressaceae plants , 2016 .

[9]  A. Llanes,et al.  Whole Genome Sequencing Allows Better Understanding of the Evolutionary History of Leptospira interrogans Serovar Hardjo , 2016, PloS one.

[10]  J. Motamayor,et al.  Comparative evaluation of total RNA extraction methods in Theobroma cacao using shoot apical meristems. , 2016, Genetics and molecular research : GMR.

[11]  M. C. P. Batitucci,et al.  COMPARISON OF RNA EXTRACTION METHODS FOR Passiflora edulis SIMS LEAVES , 2016 .

[12]  B. R. Valverde,et al.  ANÁLISIS TÉCNICO DEL ÁRBOL DEL MEZQUITE (Prosopis laevigata Humb. & Bonpl. ex Willd.) EN MÉXICO TECHNICAL ANÁLISIS OF THE MESQUITE TREE (Prosopis laevigata Humb. & Bonpl. ex , 2014 .

[13]  M. Hanafi,et al.  Extraction of total RNA from mangrove plants to identify different genes involved in its adaptability to the variety of stresses. , 2013 .

[14]  Arun Kumar,et al.  An RNA isolation system for plant tissues rich in secondary metabolites , 2011, BMC Research Notes.

[15]  Caroline Dean,et al.  Protocol: A simple phenol-based method for 96-well extraction of high quality RNA from Arabidopsis , 2011, Plant Methods.

[16]  Gina Solano-Flórez,et al.  Optimización de la extracción de ADN de Passiflora ligularis para el análisis por medio de marcadores moleculares , 2009 .

[17]  F. Vázquez-Flota,et al.  Isolation of functional total RNA from Argemone mexicana tissues , 2008 .

[18]  M. Malnoy,et al.  A method for isolating total RNA from pear leaves , 2001, Plant Molecular Biology Reporter.

[19]  P. Namasivayam,et al.  A simple and rapid method for RNA isolation from plant tissues with high phenolic compounds and polysaccharides , 2007 .