La courbe de titration de l'insuline et de ses fractions

On a mesure au moyen d'une electrode de verre les courbes d'electrotitration de l'insuline cristalline dans KCl 0,1 N, depuis pH 2 jusque pH 11. Dans la region alcaline les courbes ne sont pas reversibles. La solubilite de l'insuline entre pH 7 et pH 9 augmente beaucoup lorsque la proteine a ete prealablement dissoute en milieu acide ou alcalin. Les quantites d'ions H liberees dependent aussi du traitement subi anterieurement. On a separe l'insuline en deux fractions suivant leur solubilite a pH 8. La fraction la plus soluble a une courbe de titration reversible en milieu homogene; dans le domaine d'insolubilite de l'insuline (pH 4 a 6,5), la courbe depend du sens de la titration. La fraction la moins soluble revele un nombre inferieur de groupes titrables en milieu alcalin. Ce nombre augmente par sejour a pH superieur a 10. Les changements survenus dans les groupes dissociables ont ete interpretes comme indiquant la presence de liaisons speciales dans lesquelles seraient impliques des groupes phenoliques et des groupes imidazole. On a calcule des courbes de titration suivant la theorie classique et suivant la theorie de Debye-Huckel. On a pu rendre compte des resultats experimentaux en assignant une seule constante de titration aux groupes de měme espece deduits de l'analyse chimique, sauf pour les groupes phenoliques. La theorie des interactions electrostatiques permet d'interpreter ces faits. Elle fournit des valeurs de pK′0 en bon accord avec les donnees obtenues avec d'autres proteines. Les pK′0 sont respectivement de 6,6, 7,8, 9,9 et 10,0 pour les groupes imidazole, α-amine, phenolique et e-amine. En utilisant comme solvant du dioxane a 40% dans une solution aqueuse 0,4 N en KCl, on a pu maintenir l'insuline en solution dans tout le domaine de pH. La courbe de titration a ete mesuree dans ce milieu et interpretee theoriquement par l'effet de l'abaissement de la constante dielectrique sur les constantes de titration.