Culture du virus de l’hépatite C, enfin !

composees seulement des genes non structuraux du VHC ont ete realisees (Figure 1B) et leur transfection dans la lignee d’hepatome humain Huh-7 a permis une replication autonome [2]. D’autres travaux ont confirme ces resultats et ont montre qu’un niveau eleve de replication etait lie d’une part a des mutations adaptatives localisees dans les regions NS3 et NS5A, et d’autre part a l’existence de clones cellulaires hautement permissifs : Huh-7.5 et Huh-7 Lunet [3]. Ces elements ont permis la construction de replicons du VHC comportant le genome entier, mais aucun replicon genomique ne permettait la production de particules virales infectieuses. De plus, il a ete montre que les mutations adaptatives favorisant la multiplication in vitro etaient en fait deleteres pour l’infectiosite in vivo chez le chimpanze [4]. L’annee 2005 aura ete determinante pour la mise au point d’un systeme cellulaire permettant de reproduire un cycle infectieux complet du VHC in vitro. Une etape essentielle fut la construction d’un clone consensus de genotype 2a, isole d’un patient japonais presentant une hepatite fulminante, forme clinique exceptionnelle dans les hepatites C. Ce clone fut appele JFH1. Un replicon subgenomique de JFH1 presentait des niveaux de replication plus eleves que les precedents, sans mutation adaptative [5]. Point crucial, la transfection du genome complet de JFH1 dans les cellules Huh-7 a permis la production de particules virales infectieuses dont l’infectiosite a ete demontree a la > Apres la decouverte du virus de l’hepatite C (VHC) en 1989, il a fallu attendre 16 ans pour disposer d’un systeme permettant la propagation du virus et la production de particules virales in vitro. La premiere etape fut la generation de replicons subgenomiques. Cependant, ce systeme n’aboutissait pas a la production de virions infectieux et permettait uniquement l’etude de la phase intracellulaire du cycle replicatif. L’identification d’une souche particuliere qui, pour des raisons encore inconnues, se repliquait a un niveau eleve dans des lignees hepatocytaires humaines a constitue une avancee decisive. Ce nouveau systeme permet a present l’etude du cycle cellulaire du VHC, element essentiel pour le developpement de nouveaux antiviraux. Le VHC infecte 170 millions d’individus dans le monde et represente l’un des agents principaux de maladie chronique du foie. Six genotypes et de nombreux sous-types ont ete decrits. Cette variabilite a des consequences therapeutiques puisque les differents genotypes ne presentent pas la meme sensibilite au traitement [1]. Comme les autres Flaviviridae, le VHC est un virus enveloppe et est constitue d’un genome a ARN simple brin de polarite positive (Figure 1A). Sa biologie restait mal connue car le chimpanze etait le seul modele animal et aucun modele de culture cellulaire ne permettait un cycle replicatif complet. Differentes strategies ont ete successivement developpees. Par analogie aux travaux realises sur le poliovirus, des constructions subgenomiques fois sur des lignees hepatocytaires et chez le chimpanze [6]. Une autre innovation de ce systeme fut la possibilite d’accroitre les titres du virus JFH1 en utilisant des cellules traitees par de l’interferon-γ [7]. Les cellules Huh7.5 semblent constituer le systeme le plus favorable a la production virale in vitro. Ces cellules presentent une mutation dans le gene RIG-I, conduisant a l’inactivation des reponses immunes innees antivirale [8]. La culture d’un virus de genotype 1a a pu etre realisee mais la production de virus infectieux etait inferieure a celle de la souche JFH1 [9]. La production de particules virales infectieuses a partir d’un genome VHC chimere resultant du remplacement des genes C, E1, E2 et NS2 de JFH1 par la sequence correspondante du virus J6 (genotype 2a) a ete egalement decrite (Figure 1C) [10]. Ce virus chimere est infectieux chez le chimpanze et apres passage chez cet animal le virus reste infectieux en culture cellulaire [11]. De plus, la replication est inhibee par l’interferon-α et les titres viraux obtenus avec ce virus chimere sont plus eleves qu’avec JFH1. Les genes structuraux de JFH1 semblent donc presenter une plus faible capacite intrinseque d’assemblage et/ou de liberation du virus. Cette hypothese est etayee par une etude recente ou la production en culture de virus chimeres intergenotypiques et intragenotypiques a ete comparee a celle de JFH1 (Figure 1D) [12]. Les titres les plus eleves ont ete obtenus avec le recombinant J6-JFH1. L’etude de ces virus chimeres a permis recemment l’identification de determinants essen-