Estandarización de la técnica de ELISA para el diagnóstico de Toxocariasis humana

Objetivo: Estandarizar la tecnica ELISA para el diagnostico de infeccion humana por Toxocara canis con antigeno excretado-secretado preparado en nuestro medio. Material y metodos: Se colecto huevos de T. canis y se les incubo con formol (2%) a 28oC hasta obtener larvas de tercer estadio, las que luego de ser liberadas fueron incubadas en RPMI a 37°C por 7 dias; se reemplazo el medio por otro similar y almaceno a -20°C. Se concentro el antigeno y se doso proteinas. Para la tecnica de ELISA se utilizo sueros de pacientes con toxocariasis y de ninos recien nacidos, como controles positivos y negativos, respectivamente, diluidos desde ¼ hasta 1/1024. Se sensibilizo placas de poliestireno con varias concentraciones de antigeno, utilizandose conjugado de peroxidasa e IgG de carnero anti IgG humana y sustrato OPD. Se realizo lectura de absorbancia a 492 nm con espectrofotometro (Multiskan plus labsystems), siendo el punto de corte el promedio aritmetico de la absorbancia de los sueros negativos mas 3 desviaciones estandar. Resultados: La concentracion optima del antigeno fue 50 ug/mL, la dilucion del suero 1/128, la dilucion del conjugado 1/1000 con densidad optica mayor a 0,241. Conclusiones: La tecnica de ELISA para diagnostico serologico de infeccion humana por Toxocara canis podria ser utilizada en estudios epidemiologicos en nuestro pais. Queda pendiente la evaluacion de su eficacia en futuros estudios.