Búsqueda de flavivirus en individuos con sospecha clínica de dengue y resultado negativo para el antígeno NS1 en Paraguay

Los flavivirus son responsables de una considerable morbi-mortalidad a nivel mundial. Entre ellos, el virus del dengue (DENV) es causante de graves problemas de salud publica en Paraguay. El objetivo del estudio fue detectar infecciones por flavivirus a traves de una reaccion de RT-nested PCR generica para flavivirus en 195 muestras de individuos con sospecha de dengue, negativos por el test inmunocromatografico (antigeno NS1 – DENV), provenientes del area metropolitana de Asuncion entre 2011 y 2013. Las muestras positivas para flavivirus fueron sometidas a dos reacciones de RT-nested PCRs especificas para DENV. El limite de deteccion (LD) para flavivirus fue de 0,2 UFP/reaccion. En total 43/195 muestras fueron positivas para flavivirus. De estas, 38/43 (88,4%) correspondieron a DENV (6 DENV-1, 30 DENV-2 y 2 DENV-3). Ademas, 5/43 casos (11,6%) positivos para flavivirus fueron negativos para DENV por ambas reacciones especificas, pudiendo deberse a infecciones por otros flavivirus. Los resultados sugieren que la utilizacion de una reaccion generica seguida de otras reacciones especificas para DENV en casos febriles negativos para NS1 por el metodo inmunocromatografico permitiria detectar mas casos de infecciones por DENV y ademas, podria contribuir a la identificacion de casos debido a infecciones por otros flavivirus.

[1]  E. Gould,et al.  ICTV Virus Taxonomy Profile: Flaviviridae , 2017, The Journal of general virology.

[2]  S. Blacksell,et al.  Commercial Dengue Rapid Diagnostic Tests for Point-of-Care Application: Recent Evaluations and Future Needs? , 2012, Journal of biomedicine & biotechnology.

[3]  Rosanna W. Peeling,et al.  Evaluation of diagnostic tests: dengue , 2010, Nature Reviews Microbiology.

[4]  J. Farrar,et al.  Comparison of two dengue NS1 rapid tests for sensitivity, specificity and relationship to viraemia and antibody responses , 2010, BMC infectious diseases.

[5]  M. Guzmán,et al.  Detection and subtyping of dengue 1–4 and yellow fever viruses by means of a multiplex RT‐nested‐PCR using degenerated primers , 2006, Tropical medicine & international health : TM & IH.

[6]  M. Nunes,et al.  Duplex Reverse Transcription-PCR Followed by Nested PCR Assays for Detection and Identification of Brazilian Alphaviruses and Flaviviruses , 2005, Journal of Clinical Microbiology.

[7]  A. Tenórioa,et al.  Generic RT-nested-PCR for detection of flaviviruses using degenerated primers and internal control followed by sequencing for specific identification , 2005 .

[8]  Natale Scaramozzino,et al.  Comparison of Flavivirus Universal Primer Pairs and Development of a Rapid, Highly Sensitive Heminested Reverse Transcription-PCR Assay for Detection of Flaviviruses Targeted to a Conserved Region of the NS5 Gene Sequences , 2001, Journal of Clinical Microbiology.

[9]  T. A. Hall,et al.  BIOEDIT: A USER-FRIENDLY BIOLOGICAL SEQUENCE ALIGNMENT EDITOR AND ANALYSIS PROGRAM FOR WINDOWS 95/98/ NT , 1999 .

[10]  A. Simpson,et al.  Rapid silver staining and recovery of PCR products separated on polyacrylamide gels. , 1994, BioTechniques.